細胞接收處理流程 :
1 :觀察有無破損漏液情況 ,如有請拍照及時聯(lián)系客服。
2 :酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細胞狀態(tài) ,觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜止2-3小時穩(wěn)定 細胞狀態(tài)。
3 :請按照細胞操作指南進行第一次傳代凍存處理。
4 :產(chǎn)品隨貨會附帶細胞說明書、細胞培養(yǎng)操作指南、細胞鑒定、支原體檢測報告。
5 :若產(chǎn)品有異?;蚱渌蓡?,可隨時聯(lián)系客服 ;轉至技術支持。
細胞接收后的處理
1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-4h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)靜置完成后,請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10× , 20×) 各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基)。
4)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
5)半貼細胞和貼壁不牢(懸?。┘毎?/font>T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用完全培養(yǎng)基重懸后打回到原培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養(yǎng)基中懸浮的細胞離心后回收。
6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。
細胞處理:
1. 復蘇細胞:從液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要復蘇的細胞,水浴鍋提前打開預熱 37℃。
1) 將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍;
2) 加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。
3) 棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基接種于 T25 培養(yǎng)瓶中(或 6cm 皿中),
培養(yǎng)過夜,第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2. 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1) 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次;
2) 加 1-2mL 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 2-3min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后,加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化;
3) 輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出至離心管中,1000rpm離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL完全培養(yǎng)基后吹勻;
4) 按 5-6mL/瓶補加完全培養(yǎng)基,將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中。
(即 1 個 T25 傳代接種至 2~3 個 T25 或者 2~3 個直徑為 6cm 的培養(yǎng)皿)
3. 細胞凍存:
1)細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1× 10^6~1×107個活細胞/ml.
2)1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每 1ml凍存液含1×10^6~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、 日期等信息。
3) 按凍存數(shù)量加入無血清凍存液后直接放-80℃冰箱過夜,后續(xù)可轉入液氮罐中長期保存。