HGF+SV40T 人牙齦成纖維細(xì)胞

國內(nèi)永生化建系

細(xì)胞鑒定

免疫熒光染色鑒定

細(xì)胞來源

國家資源庫

細(xì)胞背景

比較了從健康和患病的人牙齦中獲得的成纖維細(xì)胞的膠原蛋白合成。用放射性氨基酸標(biāo)記細(xì)胞，通過CM-纖維素色譜和溴化氰肽分析對(duì)合成的膠原蛋白進(jìn)行NaCl分級(jí)分離后表征。研究了2個(gè)細(xì)胞系，5個(gè)來自健康牙齦，1個(gè)來自患有慢性炎癥性牙周炎的牙齦，2個(gè)來自急性發(fā)炎的牙齦。所有細(xì)胞系主要合成I型膠原蛋白。III型膠原蛋白是所有細(xì)胞系的次要產(chǎn)物，除了來自患病組織的細(xì)胞系。來自患病牙齦的六個(gè)細(xì)胞系中的五個(gè)和來自急性發(fā)炎組織的兩個(gè)細(xì)胞系中的兩個(gè)合成了可溶于1.3M NaCl的膠原蛋白。α1/α3比率和溴化氰肽圖譜表明該級(jí)分含有α1[I]3型膠原蛋白。α<>[I]<>膠原蛋白在從健康牙齦獲得的成纖維細(xì)胞系中檢測不到。發(fā)炎的人牙齦似乎含有成纖維細(xì)胞，其表型與正常組織的細(xì)胞不同，因?yàn)樗鼈兡軌蚝铣搔?/font><>[I]<>膠原蛋白。

細(xì)胞特性

形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣，貼壁生長。用途：僅供科研使用。

培養(yǎng)條件

1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；p/s雙抗，1%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

注意事項(xiàng)

貼壁細(xì)胞參考：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶/6cm培養(yǎng)皿中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

4）運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。

懸浮細(xì)胞參考：

懸浮狀態(tài)下生長的細(xì)胞，可以通過向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來維持細(xì)胞的生長狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×106個(gè)/mL（不同細(xì)胞對(duì)密度要求不同，）可以維持細(xì)胞的正常生長。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:4的比例進(jìn)行。

運(yùn)輸形式

常溫發(fā)貨：收到后T25瓶消毒再放置培養(yǎng)箱靜置2-3小時(shí)后觀察密度和狀態(tài)拍照2-3張反饋給銷售，密度達(dá)標(biāo)就可以傳代。前期傳代比例1:2，等再次長滿后傳代時(shí)建議凍存其中一整瓶成1個(gè)1ml凍存管，另外一瓶繼續(xù)傳代，反復(fù)凍存2-3只后才擴(kuò)增做實(shí)驗(yàn)，以防突發(fā)情況引起斷種。

干冰發(fā)貨：常規(guī)細(xì)胞發(fā)貨凍存管2只，復(fù)蘇1只，另外一只備用，第一個(gè)復(fù)蘇不成功時(shí)嚴(yán)格按照廠家要求復(fù)蘇第二個(gè)，均沒有復(fù)蘇成功的情況即時(shí)留存復(fù)蘇照片通知銷售。

生物安全

1. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(huì)泄漏，并會(huì)慢慢充滿液氮。解凍時(shí)，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險(xiǎn)力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚(yáng)的碎屑造成人員傷害。