對于懸浮細(xì)胞，HAKATA細(xì)胞庫一般選擇2種發(fā)貨形式，1瓶為T25瓶的，1管為離心管形式，離心管形式的操作方式：收到離心管酒精消毒放入培養(yǎng)穩(wěn)定2-4H后進(jìn)行1000rpm離心5min。去除上清后保留細(xì)胞沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸混勻轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)，接種后培養(yǎng)瓶豎著放入培養(yǎng)箱，次日不移動，第三日觀察細(xì)胞的狀態(tài)及密度。詳細(xì)說明如下：
1. NK-92細(xì)胞為懸浮生長，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)分散的細(xì)胞，并且細(xì)胞間隙會有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片；
2. NK-92細(xì)胞對營養(yǎng)需求很高，建議使用進(jìn)口胎牛血清和馬血清培養(yǎng)，白介2的質(zhì)量對NK-92的生長影響很大，正常培養(yǎng)時(shí)換液周期為2天，建議使用半量換液和離心換液交替進(jìn)行，即半量換液1-2次后離心全量換液一次，盡量減少離心次數(shù)；
3. 細(xì)胞生長時(shí)聚集的細(xì)胞團(tuán)會逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)顯微鏡下為白色透亮的，若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)可在換液后將細(xì)胞團(tuán)輕輕搖散，或者用移液器輕輕吹散，吹打力度不可過大，否則會出現(xiàn)大量死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。這個細(xì)胞沒有聚團(tuán)的活性很低。細(xì)胞對營養(yǎng)要求也很高，千萬不能團(tuán)塊太大營養(yǎng)不足，不然48小時(shí)細(xì)胞就會死亡。這個細(xì)胞計(jì)數(shù)是不準(zhǔn)確的 因?yàn)榧?xì)胞成團(tuán)長，團(tuán)塊不可能吹散計(jì)數(shù)，還有就是散落的細(xì)胞細(xì)胞活性不好，所以細(xì)胞檢測活性也是不準(zhǔn)確的。
4. 運(yùn)輸條件可能會對細(xì)胞造成一定的影響，收到細(xì)胞后請按以下方法處理：
a) 收到細(xì)胞后靜置，顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍照，主要找聚集的細(xì)胞團(tuán)；
b) 將培養(yǎng)瓶豎置，靜置4~6h，肉眼觀察大部分細(xì)胞團(tuán)都沉到底部后，將多余的培養(yǎng)基輕輕倒入50ml離心管中離心收集一部分細(xì)胞，底部留3~4ml（剩余20ml左右時(shí)可換用移液器吸取上清，保證大部分細(xì)胞團(tuán)留在瓶中），補(bǔ)加3~4ml新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，若細(xì)胞量較多可分兩瓶，離心收集的細(xì)胞也可單獨(dú)接種培養(yǎng)；
c) 細(xì)胞對機(jī)械損傷特別敏感，所以最好是不要離心
5. 細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)不能離心處理，提前準(zhǔn)備一個離心管，加10ml培養(yǎng)基，把溶解后的凍存細(xì)胞接入，靜置2小時(shí)左右，細(xì)胞都沉降在底部，去上清，用完全培養(yǎng)基接到T25培養(yǎng)瓶內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)
特別注意
細(xì)胞是聚團(tuán)的，肉眼能觀察到，盡量多吸掉上清液，只能留500ul左右，然后加入隨貨贈送的完全培養(yǎng)基5ml 輕輕搖晃至細(xì)胞團(tuán)有部分松開，細(xì)胞盡量不要離心，不要用槍頭去吹，細(xì)胞傳代的時(shí)候也是一樣的額，直接補(bǔ)加對應(yīng)體積完全培養(yǎng)基搖晃培養(yǎng)瓶后分瓶，不要吹打。換液的時(shí)候也是豎著培養(yǎng)后吸掉上清液后加完全培養(yǎng)基就可以，細(xì)胞不要離心不要吹打。
